1. Haddii aan helo tuubo unug barafaysan, si toos ah ma u gelin karaa nitrogen dareere ah si loo kaydiyo?
Xaalado badan, unugyada lagu qaado baraf engegan (-80°C) ayaa dib loogu celin karaa nitrogen dareere ah ka dibna si dhakhso ah ayaa loo dhalaalin karaa ka dib.Si kastaba ha ahaatee, jiritaanka unuggu waa la dhimi karaa daawayntan ka dib.Qaar ka mid ah khadadka unugyada xasaasiga ah, tani waxay ka dhigi kartaa soo kabashada unug mid aad u adag.Dhacdadan ayaa loo malaynayaa inay sabab u tahay isbeddelka qaab dhismeedka kiristaalo barafka ee unugyada taas oo ka dhalatay isbeddelka heerkulka.Sidaa darteed waxaa lagula talinayaa in unugyada la dhalaaliyo oo la dhaqan geliyo sida ugu dhakhsaha badan ee suurtogalka ah ka dib marka la helo.Iska yaree wakhtiga kaydinta -80°C.Heerkulkan waxa kaliya loo isticmaalaa gaadiidka.
2. Waa maxay tillaabooyinka badbaadada ee la qaadayo marka unugyada laga saarayo nitrogen dareeraha ah si ay u soo kabtaan?
Unugyada cryotubes ee ku jira nitrogen dareeraha ah ee aan si buuxda loo xirin oo leh nitrogen dareere ah oo ka soo daadanaya iyaga ayaa keeni kara qarax haddii heerkulka cryotube uu aad u kordho marka dhalaalayo.Sidaa darteed waxaa lagula talinayaa in muraayadaha iyo galoofyada ilaalinta la xidho marka laga saarayo unugyada nitrogen dareeraha ah.Dib-u-soo-nooleynta, tuubada qaboojinta waa in si joogto ah loo ruxruxaa qubeyska 37°C si ay si buuxda u dhalaaliso xalalka qaboojinta 1-2 daqiiqo gudahood.Ka dib, ku masax bannaanka tuubada masar alkohol ah, ka dibna u qaad miiska aadka u nadiifka ah oo u gudbi unugyada tuubada centrifuge leh 10 ml oo dhexdhexaad ah oo dhaqameed lagu daray, sentifuge at 1000 rpm 5-10 daqiiqo, tuur heer sare ah, ku dar qadarka ku haboon ee dhexdhexaad dhaqameedka oo ku talaal weelka dhaqanka oo ku shub 5% CO2 incubator.
3. Maxay tahay sababta unugyadu loogu kaydin karo wajiga uumiga ee haanta nitrogen dareeraha ah halkii ay ka ahaan lahaayeen heerka dareeraha?
Unugyada lagu kaydiyo wajiga gaaska ee nitrogen dareeraha ah waxay u badan tahay in la soo nooleeyo.Halka marxaladda dareeraha ah ee nitrogen dareeraha ah, haddii tuubooyinka lyophilisation aan si habboon loo xidhin ama ay leeyihiin daadad, xidhiidhka tooska ah ee u dhexeeya unugyada iyo nitrogen dareeraha ah waxay wax u dhimi kartaa jiritaanka unugyada ka dib dhalaalidda.
4. Unugyada ka joojinta, sidee u beddelaa dhexdhexaadinta dhaqanka?
Dhaqangelinta unugyada ka joojinta waxaa lagu sameyn karaa iyada oo si fudud loogu daro dhexdhexaad cusub (haddii boosku ogolaado) ama iyada oo unugyada laga soocayo dhexdhexaadkii hore iyadoo la isticmaalayo centrifugation (100 xg 5 daqiiqo) ka dibna dib u soo celinta unugyada degdegay ee dhexdhexaad cusub.Si kastaba ha ahaatee, inta badan khadadka unugyada ka joojinta, si fudud ku darida dhexdhexaadka ayaa ah habka ugu wanaagsan.Si kastaba ha ahaatee, dhexdhexaadku wuxuu u baahan yahay in dib loo cusboonaysiiyo ka hor intaanay unugyadu gaarin cufnaanta ugu weyn.Cufnaanta cufnaanta unugyadu way kala duwan yihiin inta u dhaxaysa 3 x 10 5 iyo 2 x 10 6 taas oo ku xidhan xariiqda gacanta iyo xaaladaha dhaqanka (nasinta ama kicinta, heerarka ogsijiinta, iwm.).Unugyada waa in lagu qaso unugga hoose si ay u oggolaadaan soo kabashada nafaqo ee ku filan si ay unugyadu u koraan logarithmically.Haddii dhexdhexaadka si fudud loo beddelo iyada oo aan la dhimin cufnaanta unugyada, unugyadu si degdeg ah ayay u dhammeeyaan dhexdhexaadka oo ay u dhintaan.Haddii unugyadu ay ka hooseeyaan cufnaantooda ugu yar, waxay geli doonaan marxalad dib u dhac ah waxayna u koraan si tartiib tartiib ah ama way dhiman doonaan.Khad kasta oo unug ka-hakin ah waxa uu leeyahay cufnaanta cufnaanta kala duwan iyo muddada dhex-dhaafka ah, markaa tirooyinka unugyada maalinlaha ahi waa habka lagu kormeero khadadka unugga ganaaxa*.
5. Waa maxay heerka CO2 ee lagu taliyey ee dhaqanka unugga?
Inkasta oo heerarka CO2 ee hababka dhaqanka unuggu ay u dhexeeyaan 0.03% ilaa 40% (sida caadiga ah agagaarka 0.03% CO2 ee jawiga), waa wax caadi ah in aan CO2 lagu darin hawada ama isku-darka CO2 ee 5% ilaa 10%.Waxaa muhiim ah in la hagaajiyo diiradda sodium bicarbonate ee dhexdhexaadka ah si loo dheellitiro heerka CO2 ee marxaladda gaaska.Unugyadu waxay soo saaraan CO2 waxayna u baahan yihiin qadar yar oo ah kaarboon aashitada koritaanka iyo badbaadada.Haddii CO2 aan lagu darin oo unugyadu ay tarmaan, 4 mM (0.34 g/L) ee sodium bicarbonate anhydrous ayaa la isticmaali karaa.Si kastaba ha ahaatee, daboolka weelka dhaqanka waa in la adkeeyaa meeshan.Haddii nidaamka dhaqanku u baahan yahay 5% ama 10% CO2, isticmaal 23.5 mM (1.97 g/L) ama 47 mM (3.95 g/L) sodium bicarbonate at 37°C, siday u kala horreeyaan, pH bilawga ah qiyaastii 7.6.Shuruudahan hoos yimaada, weelka waa in laga tagaa iyada oo aan xidhnayn ama saxan Petri waa in loo isticmaalaa si loo ilaaliyo dheellitirka gaaska.
6. Maxay unugyada qaar ugu baahan yihiin sodium pyruvate?Immisa pyruvate sodium ayaan ku darayaa dhexdhexaadka?
Pyruvate waa dheef-shiid kiimikaad asiidh organic ah oo ku dhex jira dariiqa glycolytic* kaas oo si sahal ah u gala kana baxa unugyada.Sidaa darteed, ku darida pyruvate sodium ee dhexdhexaadka ah waxay bixisaa labadaba ilaha tamarta iyo ilaha kaarboonka ee anabolism, waxay ka caawisaa in la ilaaliyo unugyo gaar ah oo gaar ah, waxay ka caawisaa cloning cell ama loo baahan yahay marka uruurinta serum ee dhexdhexaadka ah la yareeyo.Sodium pyruvate sidoo kale waxay kaa caawinaysaa in la yareeyo cytotoxicity fluorescence-ku keeno.Sodium pyruvate waxaa badanaa lagu daraa ugu dambeyntii 1 mM.Xalalka pyruvate sodium ee laga heli karo ganacsi ahaan inta badan waa 100 mM kaydinta kaydinta (100X).
Lagu turjumay www.DeepL.com/Translator (nooca bilaashka ah).
Waqtiga boostada: Jun-21-2022